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  ??‍??‍??‍?? A equipe era formada por jogadores de uma mesma fam�lia: Arthur, Fernando e Zez� Carvalheira, esses foram os primeiros �dolos alvirrubros. Em 2019 logo no come�o do estadual, o N�utico fez uma excelente campanha na primeira fase do Campeonato Pernambucano, terminando no segundo lugar. No dia 3 de fevereiro de 2019 assinou contrato com o Chelsea por um per�odo de cinco anos. No dia 6 de maio de 2019, foi relatado um dos membros do Liverpool, Tost�o como treinador, n�o renovaria o contrato. roleta free genio da lampada jogo

  Resumos

  O doping gen�tico caracteriza-se pelo uso n�o terap�utico de c�lulas, genes e elementos g�nicos, ou a modula��o da express�o g�nica com objetivo de aumentar o desempenho esportivo.

  Isto somente pode ser realizado atrav�s de manipula��o g�nica.

  Esta pr�tica dopante caracteriza-se como virtualmente "indetect�vel", o que representa novos desafios anal�ticos paragenio da lampada jogodetec��o.

  Esta revis�o apresenta o doping gen�tico e poss�veis m�todos de detec��o para evitar futuras fraudes desportivas.

  El dopaje gen�tica se caracteriza por el uso no terap�utico de c�lulas, genes y elementos gen�ticos o la modulaci�n de la expresi�n g�nica con el objetivo de aumentar el rendimiento deportivo.

  Esto s�lo puede lograrse gracias la manipulaci�n gen�tica.

  Esta pr�ctica dopante se caracteriza por ser casi "imperceptible", lo que representa nuevos retos para la detecci�n anal�tica.

  Esto presenta la revisi�n y posible dopaje gen m�todos de detecci�n para prevenir los futuros tramposos en el deportes.

  ARTIGOS DE REVIS�O

  Doping gen�tico e poss�veis metodologias de detec��o

  Gene doping and possible detection methodologies

  Dopaje gen�tica y los posibles m�todos de detecci�nMs.

  Andr� Valle DE BairrosI; Grad.

  Alex Almeida PrevedelloII; Esp.

  Liliana de Los Santos MoraesIII

  IMestregenio da lampada jogoBioqu�mica Toxicol�gica pela Universidade Federal de Santa Maria e Doutorandogenio da lampada jogoToxicologia e An�lises Toxicol�gicas da Universidade de S�o Paulo (S�o Paulo - S�o Paulo - Brasil).

  E-mail: andrebairrosyahoo.com.br

  IIGraduadogenio da lampada jogoFarm�cia pela Universidade Federal de Santa Maria (UFSM) (Santa Maria - Rio Grande do Sul - Brasil).

  E-mail: alex_prevedellohotmail.com

  IIIEspecialistagenio da lampada jogoFarm�cia Hospitalar pela Escola Superior de Gest�o e Ci�ncias da Sa�de, Farmac�utica da Secret�ria de Sa�de do Munic�pio de Uruguaiana (Uruguaiana - Rio Grande do Sul - Brasil).

  E-mail: lili_moraes_4hotmail.comRESUMO

  O doping gen�tico caracteriza-se pelo uso n�o terap�utico de c�lulas, genes e elementos g�nicos, ou a modula��o da express�o g�nica com objetivo de aumentar o desempenho esportivo.

  Isto somente pode ser realizado atrav�s de manipula��o g�nica.

  Esta pr�tica dopante caracteriza-se como virtualmente "indetect�vel", o que representa novos desafios anal�ticos paragenio da lampada jogodetec��o.

  Esta revis�o apresenta o doping gen�tico e poss�veis m�todos de detec��o para evitar futuras fraudes desportivas.

  Palavras-chave: Atleta; detec��o; doping; genes.

  ABSTRACT

  Gene doping is characterized by non-therapeutic use of cells, genes and genetic elements, or modulation of gene expression with the aim to increase sports performance.

  This can only be accomplished through gene manipulation.

  This doping practice is characterized as virtually "undetectable", which represents new challenges for analytical detection.

  This review presents and possible gene doping detection methods to prevent future sports cheats.

  Keywords: Athlete; detection; doping; genes.

  RESUMEN

  El dopaje gen�tica se caracteriza por el uso no terap�utico de c�lulas, genes y elementos gen�ticos o la modulaci�n de la expresi�n g�nica con el objetivo de aumentar el rendimiento deportivo.

  Esto s�lo puede lograrse gracias la manipulaci�n gen�tica.

  Esta pr�ctica dopante se caracteriza por ser casi "imperceptible", lo que representa nuevos retos para la detecci�n anal�tica.

  Esto presenta la revisi�n y posible dopaje gen m�todos de detecci�n para prevenir los futuros tramposos en el deportes.

  Palabras-clave: Deportista; detecci�n; dopaje; genes.

  INTRODU��O

  A busca pelo �timo desempenho tem sido uma constante no esporte de alto rendimento.

  Para tanto, muitos atletas acabam utilizando drogas e m�todos il�citos, que � denominado doping, os quais podem ter importantes efeitos adversos (ARTIOLI; HIRATA; LANCHA J�NIOR, 2007).

  O doping est� definido pela presen�a de subst�ncias proibidas (drogas ou f�rmacos que incrementam o rendimento de um atleta) e de seus metab�litos ou marcadoresgenio da lampada jogouma amostra (sangue ou urina) de um atleta, al�m de m�todos il�citos (WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2010).

  Entre as pr�ticas proibidas pela WADA, encontra-se o doping gen�tico.

  O doping gen�tico caracteriza-se pelo uso n�o terap�utico de c�lulas, genes e elementos g�nicos, ou a modula��o da express�o g�nica, que tenham a capacidade de aumentar o desempenho esportivo (WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2010).

  Tal pr�tica � realizada por meio de manipula��o g�nica, que pode ser definida como um conjunto de t�cnicas que permitem a inser��o e express�o de um gene terap�uticogenio da lampada jogoc�lulas-alvo que apresentam algum tipo de desordem de origem gen�tica (n�o necessariamente heredit�ria), possibilitando a corre��o dos produtos g�nicos inadequados que causam doen�as (HUARD et al., 2003).

  Nesse sentido, os atletas poderiam beneficiar-se das t�cnicas de transfer�ncia de genes como qualquer outra pessoa cujo quadro cl�nico imponha tal necessidade (FILIPP, 2007).

  Al�m disso, a grande dificuldade de detec��o desta pr�tica dopante estimulariagenio da lampada jogoutiliza��ogenio da lampada jogolarga escala no meio esportivo (FILIPP, 2007).

  Entretanto, metodologias anal�ticas est�o sendo desenvolvidas a fim de detectar altera��es nos genomas de atletas e/ou seus respectivos produtos de biotransforma��o (ARG�ELLES; ZAMBORA, 2007; THEVIS et al., 2010).

  Desta forma, o doping gen�tico chama a aten��o das autoridades quanto agenio da lampada jogoincr�vel dificuldade para identifica��o deste m�todo il�cito.

  Por isso, mais estudos s�o necess�rios para o desenvolvimento de metodologias anal�ticas capazes de detectar este tipo de fraudegenio da lampada jogoexames antidoping.

  ASPECTOS GERAIS DO DOPING

  O conceito de dopagem apresentado no C�digo Antidopagem do Movimento Ol�mpico � "o uso de um expediente - subst�ncia ou m�todo - que pode ser potencialmente prejudicial � sa�de dos atletas, capaz de aumentar seu desempenho e que resulta na presen�a de uma subst�ncia proibida ou na evid�ncia do uso de um m�todo proibido no organismo do atleta" (RAMIREZ; RIBEIRO, 2005; OGA; CAMARGO; BATISTUZZO, 2008).

  Entre os fatores que contribuem para a dopagem est�o: freq��ncia, dura��o e intensidade dos treinamentos e das competi��es; per�odo de recupera��o insuficiente entre os eventos; condi��es atmosf�ricas desfavor�veis e estresse provocado pelo p�blico, meios de comunica��o e patrocinadores (AQUINO NETO, 2001; OGA; CAMARGO; BATISTUZZO, 2008).

  A dopagem, al�m de ser um fato eticamente conden�vel, representa risco para quem a utiliza, pois a escolha da pr�tica dopante � feita de acordo com o que o atleta, que hipoteticamente, acredita que poder� favorecer o seu rendimentogenio da lampada jogoum determinado esporte.

  Por isso, a ag�ncia Mundial Antidoping (WADA) organiza uma lista com as classes de subst�ncias e m�todos que apresentam como caracter�stica, pelo menos, dois dos tr�s seguintes crit�rios: possibilidade de aumento no desempenho, risco � sa�de e viola��o do esp�rito esportivo (OGA; CAMARGO; BATISTUZZO, 2008; DE ROSE, 2008).

  Esta lista inclui agentes anab�licos, horm�nios e outras subst�ncias relacionadas, agonista Beta-2 adren�rgico, agentes com atividade antiestrog�nica, diur�ticos e outros agentes mascarantes, estimulantes, narc�ticos, canabin�ides e glicocortic�ides (WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2010).

  De acordo com a WADA, o controle antidoping deve ocorrer durante o per�odo das competi��es e entre os eventos esportivos.

  O controle antidoping entre as competi��es pode ser feita a qualquer momento (no treinamento, na casa do atleta ou pr�ximo a competi��o) e consiste na identifica��o e quantifica��o de agentes anab�licos e com atividade antiestrog�nica, beta-2-agonista, diur�ticos e agentes mascarantes (DE ROSE, 2008; WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2009a).

  Em rela��o �s metodologias anal�ticas empregadas no controle antidoping estabelecidas pela WADA, s�o divididasgenio da lampada jogo3 etapas: coleta da amostra, screening e confirma��o do resultado (PEREIRA et al.

  , 2008; WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2009a).

  Neste sentido, o controle do doping pode ser efetuadogenio da lampada jogoamostra de urina, sangue ou ambos.

  Durante a coleta � verificado algum tipo de manipula��o f�sica ou qu�mica da amostra biol�gica (urina ou sangue).

  A amostra biol�gica passa por um screening que � realizado atrav�s de imunoensaio, eletroforese de focaliza��o isoel�trica (eritropoetina sint�tica), cromatografia l�quida (LC) e cromatografia gasosa (GC).

  Nos casos positivos, � refeito a mesma determina��o para algumas subst�ncias como a eritropoetina recombinante humana (rEPO) e os ensaios cromatogr�ficos s�o realizados novamente com aux�lio de um espectr�metro de massa tandem (MSn).

  No caso de ester�ides end�genos, os exames s�o realizados atrav�s de GC acoplado a um espectr�metro de massa de raz�o isot�pica (GC-IRMS) (PEREIRA et al.

  , 2008; WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2009a).

  Recentemente, a WADA implementou o passaporte biol�gico, o primeiro m�todo indireto que realiza uma s�rie de coletas sangu�neas para verifica��o de altera��es significativasgenio da lampada jogopar�metros desta amostra com o objetivo do monitoramento longitudinalgenio da lampada jogoatletas de alto n�vel e que vem a somar-se aos tradicionais m�todos diretos (WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2009b).

  Em rela��o aos m�todos proibidos pela WADA s�o enquadrados da seguinte maneira: transportadores de oxig�nio, manipula��es qu�micas e f�sicas e dopagem gen�tica (WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2010).

  DOPING GEN�TICO

  O doping gen�tico � considerado o uso n�o terap�utico de c�lulas, genes e elementos g�nicos que venha a aumentar o desempenho f�sico do atleta por meio da terapia g�nica (WORLD ANTI DOPING AGENCY, 2010).

  A implica��o das novas interven��es gen�ticas tem fascinado n�o s� os pesquisadores, m�dicos e geneticistas, mas tamb�m treinadores e atletas que visam o aprimoramento do desempenho atl�tico de par�metros biol�gicos, tais como for�a, pot�ncia e fornecimento de oxig�nio, al�m do tratamento e reabilita��o de les�es, para criar uma vantagem sobre os outros competidores (HUARD et al.

  , 2003; HAISMA; DE HON, 2006; AZZAZY, 2010).

  Usando princ�pios b�sicos da terapia g�nica, o doping gen�tico injeta genes diretamente no corpo do atleta utilizando m�todos in vivo ou ex vivo (AZZAZY; MANSOUR; CHRISTENSON, 2005).

  No m�todo in vivo, a entrega do gene pode ser feita por m�todos f�sicos, qu�micos ou biol�gicos, sendo este �ltimo o mais utilizado.

  Neste caso, utiliza-se v�rus (retrov�rus, adenov�rus, v�rus adeno-associados, lentiv�rus) como vetores que s�o modificados biologicamente para promover a inser��o do gene artificialgenio da lampada jogoc�lulas de um determinado �rg�o ou tecido-alvo (AZZAZY; MANSOUR; CHRISTENSON, 2005; SINN; SAUTER; MCCRAY JUNIOR, 2005).

  A t�cnica de doping gen�tico ex vivo envolve a transfer�ncia, primeiramente, de genes para c�lulasgenio da lampada jogomeio de cultura e reintrodu��o para o tecido alvo do atleta.

  Uma vez implantada no atleta, essas c�lulas aumentam a express�o de horm�nios e outras subst�ncias bioqu�micas que aumentam o seu desempenho f�sico (SINN; SAUTER; MCCRAY JUNIOR, 2005).

  Os poss�veis alvos prim�rios do doping gen�ticogenio da lampada jogohumanos s�o: a eritropoietina (EPO), enzima conversora de angiotensina 1, horm�nio do crescimento humano (hGH), fator de crescimento 1 semelhante a insulina (IGF-1), inibidor de genes da miostatina, folistatina, receptor ativado por proliferador peroxissomal (PPARs), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), endorfinas e encefalinas, leptina, fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK) e actinina alfa-3 (ACTN3) (UNAL; UNAL, 2004; GATZIDOU; GATZIDOU; THEOCHARIS, 2009; AZZAZY, 2010).

  Diante da diversidade de genes, diferentes t�cnicas anal�ticas t�m sido sugeridas para a determina��o de doping gen�tico.

  METODOLOGIAS PARA DETEC��O DO DOPING GEN�TICO

  A WADA iniciou uma s�rie de pesquisas visando estar preparada para o mundo do doping gen�tico (MCCRORY, 2003; PINCOCK, 2005).

  Os pesquisadores sugerem v�rios testes biol�gico-laboratoriais que podem expor fraudes gen�ticas (MCCRORY, 2003; PINCOCK, 2005; AZZAZY; MANSOUR; CHRISTENSON, 2005).

  Quando o perigo do doping gen�tico foi reconhecido pela primeira vez, �rg�os de controle de doping, cientistas e autoridades desportivas estavam preocupados com a dificuldade ou at� mesmo incapacidade degenio da lampada jogodetec��o (FRIEDMANN; KOSS, 2001).

  A base para essa opini�o era que tanto o transgene quanto a prote�na expressa seria indistingu�vel de seus hom�logos end�genos (BAOUTINA et al., 2008).

  Neste sentido, Filipp (2007) discutiu a possibilidade de indiv�duos que apresentam muta��es ben�ficasgenio da lampada jogodeterminados genes alvos podem demonstrar vantagens naturais sobre os demais competidores, por�m um exame antidoping baseadogenio da lampada jogouma an�lise gen�tica poderia resultargenio da lampada jogofalso-positivo para o atleta com alguma muta��o.

  Neste sentido, as estrat�gias anal�ticas para detec��o do doping gen�tico poderiam ser realizadas atrav�s da detec��o direta e/ou indireta da manipula��o g�nica (AZZAZY; MANSOUR, 2007; PALMER et al., 2004).

  DETEC��O DIRETA DO DOPING GEN�TICO

  As estrat�gias adequadas que poderiam ser utilizadas para a detec��o do doping gen�tico seria a an�lise direta do transgene, da prote�na transg�nica e/ou do vetor utilizado para a introdu��o do transgene (AZZAZY; MANSOUR, 2007; BAUOTINA et al., 2008).

  Sugere-se a utiliza��o de t�cnicas moleculares como a rea��o da transcriptase reversa, seguida da rea��ogenio da lampada jogocadeia da polimerase (RT-PCR) para o estudo de RNA, caso o problema seja a sele��o da regi�o do genoma para estudo.

  Os RNAs espec�ficos codificam ou est�o envolvidos na tradu��o de diferentes prote�nas, sendo que por vezes, uma mesma prote�na � traduzida por diferentes RNAs (WANG et al., 2003).

  DETEC��O DE PROTE�NAS TRANSG�NICAS

  Na terapia g�nica, transfer�ncia e subseq�ente express�o do transgene s�o monitoradas pela detec��o do produto do transgene ou por um componente do vetor.

  O transgene normalmente substitui um gene defeituoso, portanto h� pouca express�o end�gena dessa prote�na.

  No doping gen�tico, o transgene n�o visa substituir o gene defeituoso, e sim as prote�nas recombinantes que s�o produzidas pelas pr�prias c�lulas dos atletas atrav�s do gene introduzido, tornando-as quase id�nticas aos seus hom�logos end�genos.

  Logo a detec��o das prote�nas transg�nicas torna-se confi�vel na medidagenio da lampada jogoque ocorrem mudan�as nos n�veis de express�o da prote�na ou modifica��es p�s-translacionais (PTM) quando o transgene � expresso ectopicamente (LASNE et al.

  , 2002; BAOUTINA et al.

  , 2008; AZZAZY, 2010).

  Para a detec��o do doping gen�tico por meio da an�lise de prote�nas alvos utilizando t�cnicas qu�micas padr�es, mudan�as nas concentra��es de prote�na ou isoformas precisariam ser evidentesgenio da lampada jogotecidos ou fluidos corporais de f�cil acesso.

  Os estudos de terapia g�nicagenio da lampada jogoanimais e humanos t�m demonstrado que a express�o do transgene � geralmente confinada ao local/tecido onde � realizada a inje��o/inser��o do transgene.

  O tecido muscular � o principal alvo para essa pr�tica, portanto para acompanhar a concentra��o da prote�na, uma biopsia muscular seria exigida para revelar poss�veis ve�culos virais ou altera��o de genes (MCCRORY, 2003; PINCOCK, 2005), o que torna praticamente invi�vel no cen�rio atual do esporte (BAOUTINA et al., 2008).

  As prote�nas constituintes de horm�nios como EPO e hGH quando secretadas, podem ocasionar algum "vazamento" para a circula��o e possivelmente para a urina.

  Dessa forma, as prote�nas transg�nicas funcionais poderiam gerar alguma informa��o paragenio da lampada jogodetec��ogenio da lampada jogocaso de doping (BAOUTINA et al., 2008).

  Neste sentido, o conhecimento das t�cnicas moleculares � capaz de diferenciar um genoma normalgenio da lampada jogorela��o a um alterado.

  O desenvolvimento dos testes moleculares pode ser resumido nos seguintes passos: extra��o de mol�culas de DNA ou RNA no sangue ou tecido objeto de estudo; amplifica��o mediante rea��ogenio da lampada jogocadeia da polimerase (PCR) ou transcri��o reversa (RT); estudos das seq��ncias de interesses; marcadores, biosensores, entre um vasto leque de t�cnicas moleculares existentes (ARG�ELLES; ZAMBORA, 2007).

  Uma poss�vel metodologia para indicar o uso de doping gen�tico � a an�lise de RNA e outras poss�veis prote�nas marcadoras por meio de m�todos cromatogr�ficos acoplados a espectr�metros de massagenio da lampada jogosoro ou plasma com a utiliza��o de t�cnicas prote�micas (HAISMA; DE HON, 2006).

  Al�m disso, a eritropoietina (EPO), produzida in vivo para transfer�ncia g�nica, difere degenio da lampada jogocontraparte fisiol�gica (LASNE et al., 2004).

  As diferen�as isoel�tricas entre as isoformas de EPO foram detectadas no soro de macacos antes e depois de inje��o intramuscular do vetor v�rus adeno-associado contendo hom�logo de �cido desoxirribonucl�ico complementar (cDNA) para EPO.

  Embora as caracter�sticas estruturais respons�veis por esse comportamento isoel�trico distinto n�o tenham sido elucidadas, a express�o ect�pica da prote�na transg�nica no tecido muscular, pode resultargenio da lampada jogomodifica��es p�s-translacionais (PTM) diferentes ao da EPO end�gena.

  Esta descoberta abriu perspectivas importantes para o controle antidoping envolvendo transfer�ncias de genes (LASNE et al., 2004).

  Uma metodologia adotada para a an�lise de genes � a t�cnica de microarrays, capaz de medir quantitativamente a express�o de milhares de genesgenio da lampada jogodiferentes tecidosgenio da lampada jogoapenas um ensaio (ROSA; ROCHA; FURLAN, 2007).

  Neste sentido, este m�todo poderia ser aplicado no doping gen�tico, pois esta metodologia poderia detectar a express�o de genes extras ou alterados, resultantes do doping gen�tico.

  No entanto, os experimentos com microarrays ainda s�o consideravelmente caros e trabalhosos.

  Al�m disso, tais experimentos envolvem uma s�rie de procedimentos laboratoriais, desde a extra��o de RNA, transcri��o reversa e marca��o fluorescente, at� a hibridiza��o final, os quais invariavelmente introduzem diferentes n�veis de varia��o adicional aos dados.

  Desta maneira, a condu��o de ensaios com microarrays requer cuidadoso delineamento experimental e an�lise estat�stica dos dados (ROSA; ROCHA; FURLAN, 2007).

  Em conseq��ncia destes fatores, a log�stica de um laborat�rio de exames antidoping n�o seria capaz de atender a demanda de examesgenio da lampada jogograndes competi��es, o que atualmente impossibilita a realiza��o desta t�cnica na rotina de laboratorial.

  DETEC��O DO VETOR

  As abordagens para detec��o de vetores virais pode ser dirigida atrav�s da detec��o de part�culas virais, prote�nas virais ou �cidos nucl�icos incorporados.

  Entretanto, a an�lise direta do vetor depende de v�rios fatores como o v�rus utilizado, o local onde ocorreu a transfer�ncia g�nica e o m�todo para detec��o do agente (BAOUTINA et al., 2008).

  A rea��o da polimerasegenio da lampada jogocadeia (PCR) � predominante neste tipo de an�lise.

  Esses vetores, o tipo de amostra e suas metodologias de detec��o est�o apresentados no Quadro 1.

  A detec��o direta de agentes utilizados no doping gen�tico, com bases nas tecnologias atuais, pode apresentar alguns desafios e/ou certas limita��es.

  As principais desvantagens deste tipo de detec��o � a regi�o do genoma a ser estudada devido a exist�ncia de diferentes genes que codificam prote�nas musculares; as prote�nas relacionadas com fun��es respirat�rias ou energ�ticas; as prote�nas relacionadas a neurotransmissores cerebrais ou horm�nios.

  Todas elas, de maneira particular ougenio da lampada jogoconjunto, podem incrementar o rendimento de um atleta.

  Nem sempre haver� mudan�as no genoma com a express�o de um gene, mas sim no fragmento de DNA transcrito como RNA mensageiro, e portanto,genio da lampada jogoprote�nas funcionais (ARG�ELLES; ZAMBORA, 2007).

  Uma estrat�gia alternativa � a utiliza��o de m�todos indiretos, com base na medi��o dos efeitos do doping gen�ticos nas c�lulas, tecidos ougenio da lampada jogotodo o organismo (BAOUTINA et al., 2008).

  No caso de doping gen�tico por EPO, a detec��o de altera��es secund�rias hematol�gicas e bioqu�micas, tais como, aumento na hemoglobina, na contagem de reticul�citos e hemat�crito, pode sugerir o doping (RIVERA et al., 2005).

  Al�m disso, Varlet-Marie e colaboradores (2004) demonstraram mudan�as no metabolismo do ferro e do RNA mensageiro utilizando a rea��o da polimerasegenio da lampada jogocadeia (PCR)genio da lampada jogotempo real.

  Contudo, as implica��es legais para o atleta com resultado positivo para qualquer forma de doping sugerem que, sempre que poss�vel, um m�todo direto que identifique inequivocamente a pr�tica ou agente dopante, que tem por base medir mudan�asgenio da lampada jogoc�lulas, tecidos ougenio da lampada jogotodo o corpo (BAOUTINA et al., 2008).

  DETEC��O INDIRETA DO DOPING GEN�TICO

  Alternativamente, m�todos indiretos de detec��o poderiam detectar mudan�as mensur�veis induzidas pelo gene dopante.

  Por exemplo, tem sido demonstrado que ap�s a inser��o e/ou express�o da respectiva prote�na recombinante, pode ocorrer uma resposta imune espec�fica (GAO et al.

  , 2004; PALMER et al., 2004).

  Al�m disso, mudan�as na transcri��o, prote�nas e metab�litos padr�es ap�s a introdu��o do transgene pode levar a marcadores substitutos, capazes de serem detectados por diferentes abordagens anal�ticas (AZZAZY; MANSOUR, 2007; BAOUTINA et al., 2008).

  Entre outros efeitos biol�gicos do doping gen�tico, respostas imunol�gicas frente ao ve�culo de entrega do gene podem ser avaliadas.

  Al�m disso, mudan�as no n�vel de express�o de outras prote�nas ou ruptura bioqu�mica celulargenio da lampada jogoresposta a uma prote�na transg�nica tamb�m pode ser avaliada (BESSIS; GARCIA COZAR; BOISSIER, 2004; BAOUTINA et al., 2008).

  RESPOSTA IMUNE HUMORAL DE VETORES DE TERAPIA G�NICA

  A administra��o de vetores virais pode induzir tamb�m resposta imune humoral.

  Ambos os fatores virais relatados, tais como o tipo de vetor, sorotipo, dose e via de administra��o e fatores relacionados ao hospedeiro, tais como a gen�tica afetam a extens�o da resposta imune humoral ao vetor (BAOUTINA et al., 2008).

  Em seres humanos, a administra��o de vetor adenov�rus ou v�rus adeno-associado (AAV) gerou aumento de anticorpos s�ricos ap�s inje��es intramuscular (MANNO et al.

  , 2003), intratumoral (DUMMER et al.

  , 2000; FREYTAG et al.

  , 2002), intradermal (HARVEY et al.

  , 1999) ou intra-arterial (art�ria hep�tica) (MANNO et al.

  , 2006) apesar de a maioria dos pacientes testados j� apresentarem anticorpos pr�-existentes ao caps�deo viral ao encontro natural com esses v�rus (CHIRMULE et al., 1999).

  A resposta imune humoral a infec��o pelo v�rus herpes simples � bem caracterizada (KOELLE; COREY, 2003).

  H� um aumento de anticorpos anti-HSV, apesar de que 50-80% dos seres humanos j� possuam esses anticorpos com resultado natural de infec��o (WAKIMOTO et al., 2003).

  Os vetores retrovirais tamb�m induzem resposta imune humoral como demonstradogenio da lampada jogoanimais, atrav�s de inje��o intravascular ou intramuscular (MCCORMACK; GONDA, 1997; MCCORMACK et al.

  , 2001), egenio da lampada jogohumanos atrav�s de inje��o intraperitoneal (TAIT et al., 1999).

  Ao contr�rio de muitos sorotipos de adenov�rus e v�rus adeno-associados, os retrov�rus tipo C n�o s�o conhecidos por infectar seres humanos (MCCORMACK et al.

  , 2001), assim a imunidade preexistente ao caps�deo n�o � comum, embora a presen�a de anticorposgenio da lampada jogoseres humanos tem sido relatada (TAIT et al., 1999).

  Este conhecimento sobre os vetores virais e a respectiva resposta imune humoral decorrente da terapia g�nica pode ser aplicado para uma poss�vel forma de detec��o para o doping gen�tico.

  Diante disso, exames imunol�gicos que avaliam os anticorpos destes vetores poderiam ser utilizados (MI et al., 2005).

  Entretanto, o atleta pode estar naturalmente infectado com um determinado v�rus como o AAV, que � largamente disseminado nos tecidos humanos (GAO et al., 2004).

  Com isso, haveria uma elevada concentra��o de anticorpos AAV na circula��o e o resultado deste exame no intuito de revelar o uso de manipula��o g�nica para fins de doping poderia ser inconclusivo.

  UTILIZA��O DE BIOSENSORES

  Acredita-se que os biosensores podem desempenhar um importante e valioso papel no controle do doping gen�tico, provavelmentegenio da lampada jogoconjunto com outras tecnologias de an�lise.

  Apesar disso, nenhum teste est� aprovado pela WADA para detec��o do doping gen�tico, havendo v�rios projetos de pesquisa patrocinados pela WADA para o desenvolvimento de metodologias para detectar esta pr�tica dopante (MINUNNI; SCARANO; MASCINI, 2008).

  Os biosensores podem ser classificadosgenio da lampada jogoduas classes: catal�ticos e baseados na afinidade (ABB).

  Como exemplo pragm�tico de biosensor catal�tico, temos o sensor de glicose, amplamente utilizado no controle da glicemia.

  J� os biosensores baseados na afinidade, s�o assim classificados devido � intera��o com a amostra, onde ocorre a forma��o de um complexo de afinidade na superf�cie do sensor (MINUNNI; SCARANO; MASCINI, 2008).

  Os ABBs s�o capazes de produzir uma resposta seletiva, sens�vel e reprodut�vel de uma amostragenio da lampada jogoum tempo curto e, al�m disso, eles tornam desnecess�rios ou reduzem consideravelmente o pr�-tratamento das amostras.

  Isto se deve a um cristal de quartzo com capacidade piezoel�trica extremamente sens�vel a varia��es de massa molecular.

  Diante disso, m�ltiplas intera��es podem ser detectadas simultaneamente, al�m de sequ�ncias espec�ficas de DNA, prote�nas recombinantes e anticorpos.

  Em rela��o a este �ltimo, AABs apresentou-se como melhor op��o de examegenio da lampada jogorela��o ao ELISA por ser mais espec�fico (MINUNNI; SCARANO; MASCINI, 2008).

  Em rela��o aos m�todos, eles podem ser utilizados tanto para formas diretas como indiretas de detec��o (TOMBELLI; MINUNNI; MASCIN, 2005).

  Em particular, ABBs foram aplicados para a detec��o de analitos alvos, tais como IGF-1 (GUIDI et al.

  , 2001) e VEGF (LI; LEE; CORN, 2007).

  Al�m disso, serve para analisar os efeitos induzidos por transgenes, como por exemplo, resposta imune humoral de v�rus adeno-associado (AAV), vetores de terapia g�nica (PALMER et al.

  , 2004) ou EPOgenio da lampada jogoterapia gen�tica (GAO et al., 2004).

  Diante das possibilidades de an�lises com diferentes metodologias anal�ticas, Thevis et al.

  (2010) desenvolveram um m�todo para detec��o de dois metab�litos urin�rios do gene agonista do PPAR-delta GW1516 utilizando cromatografia l�quida acoplada a um espectr�metro de massa tandem (LC-MSn) e resson�ncia magn�tica nuclear (RMN).

  Este trabalho cient�fico permitiu pela primeira vez detectar metab�litos de um gene alvo do doping gen�ticogenio da lampada jogouma situa��o de manipula��o g�nica na urina, o que permite a an�lise antidoping sem a necessidade de procedimentos invasivos.

  CONSIDERA��ES FINAIS

  Nesta revis�o procuramos demonstrar o doping gen�tico e as metodologias anal�ticas dispon�veis e suas limita��es.

  Por�m, recentemente identificaram-se metab�litos de um gene alvo na urinagenio da lampada jogouma situa��o de manipula��o g�nica, abrindo caminho para a determina��o anal�tica de outros metab�litos de genes alvos do doping gen�ticogenio da lampada jogouma rotina de exames antidoping.

  No entanto, um aspecto pouco discutido na literatura s�o estudos referentes � intera��o entre genes manipulados e o uso de f�rmacos.

  Este fato poderia mascarar o uso do doping gen�tico.

  Deste modo, determinados f�rmacos que n�o est�o na lista de subst�ncias proibidas da WADA poderiam ser acrescentadas, aumentando o n�mero da classe de medicamentos e an�logos.

  Conseq�entemente, isso acarretariagenio da lampada jogonovos desafios anal�ticos para a detec��o do doping.

  Diante disso, o doping gen�tico � muito recente e carece de mais estudos, pois novos genes ser�o alvos deste tipo de doping, o que implicar�genio da lampada jogonovos riscos a sa�de do atleta, bem como na cria��o de novas metodologias anal�ticas para evitar fraudesgenio da lampada jogocompeti��es esportivas de alto n�vel.

  Recebido: 01 maio 2010Aprovado: 18 abr.2011

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